Title (deu)
Charakterisierung equiner intestinaler Organoide mittels Immunfluoreszenzfärbung und Western Blot
Author
Anna Heckl
Assessor
ingrid Walter
Degree supervisor
Franziska Dengler
Description (deu)
Diplomarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2023
Abstract (deu)
In der Forschung wird heutzutage unter Berücksichtigung des 3R-Prinzips zunehmend versucht von in-vivo-Modellen zu geeigneten in-vitro-Modellen überzugehen. In diesem Zusammenhang wurden sogenannte Organoide aus Stammzellen entwickelt, welche ganze Organe im Labormaßstab darstellen und Rückschlüsse auf pathophysiologische Vorgänge ermöglichen sollen. So wurden auch equine Darmorganoide etabliert, welche das Jejunumepithel in vitro widerspiegeln sollen, um somit pathophysiologische Mechanismen der Kolik genauer untersuchen zu können. In dieser Arbeit wurden eben jene equinen Darmorganoide, welche in verschiedenen Medien kultiviert wurden, untersucht und mit nativen equinen Jejunumepithelien in Bezug auf die Expression von Markerproteinen verglichen, um so Rückschlüsse darauf ziehen zu können, ob equine Jejunumenteroide ein geeignetes invitro- Modell darstellen. Zu diesem Zwecke wurden Transportproteine (Na+-Glukose- Cotransporter [SGLT-1] und Glukosetransporter 2 [GLUT-2]), ein Strukturprotein (VILLIN) und ein Tight-Junction-Protein (Claudin 1 [CLDN-1]) qualitativ mittels Immunfluoreszenzfärbung und quantitativ mittels Western Blot Analyse nachgewiesen. Die Untersuchungen ergaben, dass die Proteine SGLT-1, GLUT-2, VILLIN und CLDN-1 alle, wenn auch in unterschiedlichem Ausmaß, in den equinen Jejunumenteroiden nachweisbar sind und diese somit wichtige Charakteristika des Jejunumepithels aufweisen. Die Ausdifferenzierung der Enterozyten in den equinen Jejunumenteroiden ist also schon so weit, dass die beschrieben Proteine exprimiert werden, jedoch ist die spezifische Lokalisation der Proteine teilweise noch nicht vollständig ausgereift. Dies lässt darauf schließen, dass equine Darmorganoide auf gutem Wege sind ein geeignetes in-vitro-Modell des Jejunumepithels darzustellen, auch wenn sie noch nicht vollständig die Funktionen des Epithels in vivo widerspiegeln. In Zukunft sollte also unbedingt auf diesem Gebiet weiter geforscht werden, um ein noch besser ausgereiftes invitro- Modell zu erhalten.
Description (eng)
Diploma thesis - University of Veterinary Medicine Vienna - 2023
Abstract (eng)
Nowadays, research is increasingly trying to move from in vivo models to suitable in vitro models, considering the 3R principle. In this context, so-called organoids have been developed from stem cells, which represent entire organs on a laboratory scale and are intended to facilitate the investigation of pathophysiological processes. Thus, equine intestinal organoids have been established to reflect the equine jejunum epithelium in vitro, in order to investigate pathophysiological mechanisms underlying colic in more detail. In this study, equine intestinal organoids cultured in different media were compared to native equine jejunum epithelia regarding the expression of marker proteins in order to determine whether equine jejunum enteroids represent a suitable in vitro model. For this purpose, transport proteins (Na+-glucosecotransporter [SGLT-1] and glucose transporter 2 [GLUT-2]), a structural protein (VILLIN), and a tight junction protein (claudin 1 [CLDN-1]) were detected qualitatively by immunofluorescence staining and quantitatively by Western blot analysis. These analyses revealed that the proteins SGLT-1, GLUT-2, VILLIN, and CLDN-1 are all detectable, albeit to varying degrees, in equine jejunum enteroids, indicating that they exhibit important characteristics of the jejunum epithelium. Thus, enterocyte differentiation in equine jejunum enteroids has reached the stage where the described proteins are expressed, but the specific localization of some of the proteins is not yet fully mature. This suggests that equine intestinal organoids are well on their way to represent a suitable in vitro model of the jejunum epithelium, even if they do not yet fully reflect the functions of the epithelium in vivo. Therefore, further efforts should be made in this field to obtain an even more precise in vitro model.
Type (eng)
Language
[deu]
Persistent identifier
AC number
Number of pages
52
Date issued
2023
License
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Persistent identifier
https://phaidra.vetmeduni.ac.at/o:3927
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application/pdf
Created
12.03.2025 11:04:15
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