Diplomarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2023

Chlamydia spp. sind gramnegative und obligat intrazelluläre Bakterien. Sie können bei Schweinen Erkrankungen des Gastrointestinal-, Respirations- und Reproduktionstraktes sowie der Konjunktiven verursachen. Bei Schweinen kommen vier Arten von Chlamydien vor: Chlamydia suis, Chlamydia pecorum, Chlamydia abortus und Chlamydia psittaci. In dieser Arbeit wurden kryofixierte mit in Formalin fixierten und in Paraffin eingebetteten Geweben mittels Immunfluoreszenzmikroskopie zum Chlamydiennachweis verglichen. Untersucht wurden Ileum, Lunge, Mesenteriallymphknoten und Inguinallymphknoten von zehn rektal Chlamydia suis ausscheidenden Ferkeln. Die Ergebnisse der Immunfluoreszenz wurden mit den respektiven quantitativen Real-time PCR-Ergebnissen der jeweiligen Organe verglichen. Ziel war es, besser einschätzen zu können, welche Gewebeaufbereitung besser dafür geeignet ist. Die Ergebnisse der Immunfluoreszenz decken sich gut mit den Ergebnissen der PCR. Die kryofixierten Proben der Immunfluoreszenz stimmen dabei besser mit den PCR-Ergebnissen überein als die Formalin fixierten Paraffin eingebetteten Proben, was man am besten anhand der Ilea sehen kann. Die histopathologischen Ergebnisse passen nicht mit den Ergebnissen der quantitativen Real-time PCR zusammen, was damit zusammenhängen kann, dass bei Schweinen häufig eine asymptomatische Infektion mit Chlamydien auftritt. Zusammenfassend sind die beiden Fixierungsmethoden zum direkten Chlamydiennachweis aus Geweben mittels Immunfluoreszenzfärbung in der Routinediagnostik nicht geeignet, da die Interpretation weniger Chlamydieneinschlüsse, wie in dieser Studie trotz vorliegender rektaler Ausscheidung gezeigt werden konnte, nicht möglich ist. Für Infektionsstudien, bei denen laut Literatur eine Vielzahl von Einschlüssen in diversen Organen mit immunhistochemischer sowie Immunfluoreszenzfärbungen darstellbar sind, ist anhand der Ergebnisse dieser Studie die Kryoasservierung als Fixierungsmethode besser geeignet.

Chlamydia spp. are gram-negative, obligate intracellular bacteria. They cause diseases of the gastrointestinal, respiratory and reproduction tract as well as the conjunctiva. There are four species of chlamydia known in pigs: Chlamydia suis, Chlamydia pecorum, Chlamydia abortus and Chlamydia psittaci. In this study cryofixed tissues were compared to formalin-fixed paraffin-embedded tissues using immunofluorescence microscopy for the detection of chlamydia. Ileum, lung, mesenteric lymph nodes and inguinal lymph nodes from ten Chlamydia suis rectally shedding nursery piglets were examined. The results of the immunofluorescence were compared to the quantitative real-time PCR results of the organs. The aim was the evaluation of the tissue processing methods. The results of the immunofluorescence match well with the results of the quantitative real-time PCR. The cryofixed samples of the immunofluorescence correspond better with the PCR results than the formalin-fixed paraffin-embedded samples, which can be seen on the ilea samples. The histopathologic results do not match with the results of the PCR. This could refer to the fact that pigs are often asymptomatically infected with chlamydia. Summing up both fixation methods for the direct detection of chlamydia in tissue with immunofluorescence in routine diagnostics are not suitable because the interpretation of low numbers of inclusions is not possible although the animals in this study were rectal shedders. For infection studies, in which according to the literature a large number of inclusions in various organs can be found with immunohistochemical and immunofluorescence staining, is the cryofixation to prefer based on the results of this study.

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