Diplomarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2022

Das Rabbit Haemorrhagic Disease Virus (RHDV) trat das erste Mal 1984 in China auf, führte zu sehr starken Verlusten in der dortigen Kaninchenpopulation und verbreitete sich von da an relativ rasant über mehrere Kontinente hinweg. 2010 wurde in Frankreich dann eine neue Variante des Virus entdeckt, das dieselben Symptome hervorrief, die ursprüngliche Form fast vollständig verdrängte und RHDV-2 genannt wurde. Das RHD-Virus gehört zur Familie der Caliciviridae und zur Gattung Lagovirus, ist ikosaedrisch, klein und besitzt eine einzelsträngige, positiv geladene RNA. Als unbehülltes Virus bleibt es in der Umwelt lange infektiös. Es wird von Tier zu Tier oder über unbelebte Vektoren übertragen und hat eine Mortalität von 90-100%. Kaninchen – bei RHDV-2 auch Feldhasen – versterben meist perakut oder akut aufgrund von Multiorganversagen begleitet von blutigen Ausflüssen, Anorexie und Apathie. Der pathologische Hauptbefund ist eine nekrotisierende Hepatitis. Eine Besonderheit bei RHDV-1 ist die Jungtierresistenz bei Jungtieren unter 2 Monaten, die bei RHDV-2 nicht beobachtet werden kann. Grundsätzlich kann weder anhand des klinischen Bildes noch im Rahmen der pathologischen Untersuchung zwischen RHDV-1 und RHDV-2 unterschieden werden. Ziel dieser Arbeit war es, eine Duplex-RT-qPCR zum gleichzeitigen Nachweis RHDV-1- und RHDV-2-spezifischer Nukleinsäuren zu etablieren. Zudem wurden 31 RHDV-1 bzw. RHDV-2 positive Proben die in den vergangenen Jahren am Institut für Virologie untersucht wurden, mit dieser Duplex-RT-qPCR nachgetestet und die Ergebnisse zusammengefasst. Es konnte gezeigt werden, dass die Duplex-RT-qPCR mit vergleichbarer Sensitivität die Viren detektierte und verlässlich voneinander unterscheiden kann, wie die bis dato verwendeten Singleplex-PCRs. Somit können RHDV-1 und RHDV-2-Nukleinsäurenachweise in Zukunft kostengünstiger angeboten werden. Von den 31 nachgetesteten Proben waren 5 RHDV-1 und 26 RHDV-2 positiv, alle Ergebnisse waren mit der neuen Methode reproduzierbar. Um eine unkontrollierte Verbreitung von RHD-Viren in der Hauskaninchen-, Wildkaninchen- und Feldhasenpopulation zu verhindern, sind, neben einer kostengünstigen und effektiven Diagnostik, begleitende Maßnahmen wie Impfprophylaxe, Desinfektionsmaßnahmen und Wildtiermonitoring empfehlenswert.

Rabbit Haemorrhagic Disease Virus (RHDV) first appeared in China in 1984, caused very heavy losses in the rabbit population there, and from then on spread relatively rapidly across several continents. In 2010, a new variant of the virus, RHDV-2, was discovered in France that caused the same symptoms and almost completely replaced the original form. The RHD virus is a Calicivirus, genus Lagovirus, it is icosahedral, small, and has a single-stranded RNA. As a non-enveloped virus, it remains infectious in the environment for a long time. It is transmitted from animal to animal or by inanimate vectors and the mortality is 90-100 percent. Rabbits - including hares in the case of RHDV-2 - usually die peracutely or acutely due to multiorgan failure accompanied by bloody discharge, anorexia, and apathy. The main pathological finding is necrotizing hepatitis. A distinctive feature of RHDV-1 is juvenile resistance in young animals under the age of 2 months, which is not observed in RHDV-2. Basically, no distinction can be made between RHDV-1 and RHDV-2 based on either the clinical picture or pathological examination. The aim of this diploma thesis was to establish a duplex RT-qPCR for a simultaneous detection of RHDV-1- and RHDV-2-specific RNA. In addition, 31 RHDV-1 or RHDV-2 positive samples that were examined at the Institute of Virology of the University of Veterinary Medicine Vienna in the past years were retested with this new duplex RT-qPCR and the results were compared. It could be shown that the duplex RT-qPCR detected and reliably distinguished the viruses with comparable sensitivity as the singleplex PCRs used to date. Thus, RHDV-1 and RHDV-2 RNA detections can be offered at a lower cost in the future. Of the 31 samples retested, 5 were RHDV-1 positive and 26 were RHDV-2 positive; all results were reproducible with the new method. To prevent uncontrolled spread of RHD viruses in the domestic rabbit, wild rabbit and brown hare population, accompanying measures such as vaccination prophylaxis, disinfection measures and wildlife monitoring are recommended, in addition to low-cost and effective diagnostics.

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