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Altered hemostatic potential and autoantibody-induced platelet desialylation in adults with primary immune thrombocytopenia
Theresa Schramm
Johanna Gebhart
Richard Moriggl
Martina Patzl
Masterarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2021
Die Immunthrombozytopenie (ITP) ist eine erworbene Autoimmunerkrankung, bei der Autoantikörper gegen Thrombozyten und Megakaryozyten gebildet werden. Der pathophysiologische Mechanismus der primären ITP ist nicht lückenlos bekannt. Die Diagnose der primären ITP gestaltet sich schwierig und erfolgt als Ausschlussdiagnose. Eine Therapie sollte nicht allein von Blutungsneigung und Thrombozytenzahl abhängig gemacht werden, sondern individuell unter Berücksichtigung des Krankheitsstadiums und Krankheitsverlaufes angepasst werden. Das Ziel dieser Studie war, das hämostatische Potential von ITP Patient*innen, zu analysieren um dessen Einfluss auf die klinische Präsentation der Patient*innen mit individuell unterschiedlicher Blutungsneigung, aber auch Thromboseneigung, zu untersuchen. Um das hämostatische Potential zu erfassen, wurde die Messung der Thrombin-Generierung, der Dynamik der Gerinnselbildung und Auflösung und eine quantitative Messung des zirkulierenden Gewebsthromboplastin durchgeführt. Da die geringe Thrombozytenzahl in primärer ITP teilweise durch Autoantikörper, welche sich an desialylierte Glykoproteinreste an der Thrombozytenoberfläche binden, verursacht wird, wurde der durch Patientenserum verursachte Desialylierungs-Status von Spenderthrombozyten mittels Durchflusszytometrie gemessen. Im Rahmen dieser Studie wurden drei Kohorten untersucht, primäre ITP Patient*innen, Patient*innen mit nicht-immun bedingter Thrombozytopenie und gesunde Kontrollen. Unsere Daten zeigten, dass ITP PatientInnen eine leicht verzögerte Thrombin-Generierung im Vergleich zu Patient*innen mit nicht-immun bedingter Thrombozytopenie und gesunde Kontrollen hatten. Auch die Gerinnselbildung war schwächer im Vergleich zu den beiden Kohorten. Am deutlichsten zeigte sich allerdings eine verzögerte Auflösung des Plasmagerinnsels (Hypofibrinolyse) bei den ITP Patient*innen im Vergleich zu beiden Kontrollgruppen. Die Menge an zirkulierendem Gewebsthromboplastin hat sich nicht merklich zwischen den Kohorten unterschieden. Im Rahmen der Lektin-Bindungs-Untersuchung konnten zwei Patienten mit verstärkter Thrombozyten-Desialylierung identifiziert werden. Zusammenfassend zeigen die Daten dieser Studie, dass Thrombin-Generierung und Gerinnselbildung leicht reduziert und die Auflösung des Gerinnsels langsamer in ITP Patient*innen als in den zwei Kontrollkohorten war. Es wurde keine erhöhte Menge an zirkulierenden Gewebsthromboplastin und auch keine Verbindung dieses Parameters zu klinischer Thrombose-Inzidenz nachgewiesen. Um eine klare Schlussfolgerung zu charakteristischer Thrombozyten-Desialylierung bei Patient*innen mit primärer ITP ziehen zu können, muss die gesamte ITP Kohorte noch weiter untersucht werden.
Master thesis - University of Veterinary Medicine Vienna - 2021
Primary ITP is a rare autoimmune disease, characterized through isolated thrombocytopenia. Its pathological mechanisms are not completely elucidated yet. Hence, diagnosis remains one of exclusion as no reliable, robust, and uniformly used clinical and/or laboratory parameters exist. Within this study the global hemostatic potential of ITP patients was thoroughly investigated, and it was aimed to link the results to clinical characteristics and especially to the heterogenous bleeding phenotype found in ITP patients. The global hemostatic potential was assed via a Thrombin generation assay, a plasma clot formation and lysis assay as well as the extracellular vesicle (EV)-associated Tissue factor activity. As the low platelet numbers are thought to be caused through autoantibodies targeting desialylated platelets and thereby marking them for destruction, a Lectin binding assay was performed. With this assay the desialylation status of ITP patient platelets was investigated, since previous studies found increased platelet desialylation in primary ITP. In this study three cohorts were investigated, primary ITP patients, patients suffering from non-immunological thrombocytopenia and healthy controls. In regard to the global hemostatic potential, we found mildly impaired Thrombin generation in ITP patients in comparison to non-immunological thrombocytopenic patients and healthy controls. Furthermore, reduced plasma clot formation was observed in ITP and significantly delayed plasma clot lysis, compared to the two control groups. No significant differences were found in EV-associated Tissue factor activity. In the Lectin binding assay only two out of 32 patients, both with a previous history of thrombosis were identified to show desialylated platelet characteristics. Summing up our data show mildly impaired Thrombin generation and plasma clot formation and delayed clot lysis in ITP patients compared to non-immunological thrombocytopenia patients and healthy controls. EV-associated TF activity did not differ and no significant association to thrombosis incidence in primary ITP could be drawn. The Lectin binding assay needs to be completed for all available ITP samples in the Vienna ITP biobank to draw final conclusions on the impact of platelet desialylation on clinical manifestations in primary ITP.
Englisch
2021
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