Diplomarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2020

Das equine Sarkoid ist der häufigste gutartige Hauttumor bei Pferden. Es handelt sich um einen fibroblastischen Tumor, welcher lokal aggressiv wächst. Bisher wurde das bovine Papillomvirus 1 und 2 als auslösendes Agens identifiziert. Lunardi et al. konnte allerdings 2013 in sechs equinen Sarkoidproben von zwei brasilianischen Pferden einen neuen Delta Papillomvirustyp, nämlich BPV 13, nachweisen und charakterisieren. Diese Arbeit befasst sich mit der Frage, ob BPV 13 auch in equinen Sarkoiden österreichischer Pferde vorkommt. Diese Frage ist von höchster Relevanz, da neue Virustypen in Sarkoiddiagnostik und -therapie mit einbezogen werden müssen. Um diese Fragestellung zu beantworten, wurden 155 DNS-Isolate aus nachweislich BPV1/2-positiven diagnostizierten Sarkoiden (n = 60) bzw. vermuteten Sarkoiden (n = 86) aus dem Archiv des RGO (Research Group Oncology; Veterinärmedizinische Universität Wien) verwendet. Zunächst wurden alle Isolate photometrisch überprüft und auf das "house keeping"-Gen β-Aktin getestet, Proben mit nicht messbarer DNA Konzentration und nicht nachweisbarem β-Aktin wurden aussortiert. Neunundneunzig DNS-Isolate wurden letztendlich mittels PCR auf BPV13 getestet. Von den 99 Proben zeigten nur zwei Banden im Bereich von 770 bp. Da beim Nachweis von BPV13 ein 771 bp-Amplifikatinsprodukt erwartet wurde, wurden diese beiden PCR-Produkte nach Re-Amplifikation bidirektional sequenziert und anschließend wurde ein Sequenzvergleich mittels BLAST vorgenommen. Dieser zeigte jedoch, dass es sich nicht um DNS von BPV13 handelt. Das Ergebnis dieser Diplomarbeit legt den Schluss nahe, dass BPV13 im Großteil der österreichischen Pferde, mit Sarkoiden bzw. sarkoidähnlichen Veränderungen, nicht vorkommt. Es unterstützt die Theorie, dass es sich bei BPV13 um eine geographische Variante von BPV2 und BPV2 handeln könnte. Papillomviren sind sehr „alte“ Viren, so dass es möglich ist, dass sich BPV 1, 2 und 13 aus einem gemeinsamen Urtyp entwickelt 49 haben und in den verschiedenen Weltregionen genetisch unabhängig zu unterschiedlichen BPV-Typen weiterentwickelt haben (Gottschling et al., 2007). Das Ergebniss ist trotz der moderaten Stichprobengröße als repräsentativ anzusehen, da die untersuchten Proben von Pferden verschiedener Rasse und Herkunft und unterschiedlichen Alters und Geschlechts stammten, die innerhalb eines sehr langen Zeitraums (2007- 2019) gesammelt wurden.

The equine sarcoid (ES) is the most common benign skin tumor in horses. It is a fibroblastic, locally agressive tumor. So far, only the bovine papillomvirus types 1 and 2 (BPV1, BPV2) have been recognized as causal agents of ES. However, Lunardi et al. recently detected a new Delta-papillomavirus termed BPV13 in six samples derived from equine sarcoids of two brasilian horses and identified this type as being closely related to BPV1 and BPV2. Hence the scientific question of this study was to assess whether BPV13 would also occur in equine sarcoids of Austrian horses. This question was relevant because potentially new causative agents of sarcoids need to be in ES diagnostics and therapeutics. A total of 155 confirmedly BPV1/2-positive DNA extracts derived from ES and suspected ES were retrieved from the archive of the RGO (Research Group Oncology; University Clinic for Horses, University of Veterinary Medicine) and first subjected to quality control. Thre latter consisted of spectrophotometric assessment of DNA concentrations and amplification of the house keeping gene β-actin using PCR. Ninetee-nine β-actin-positive DNS-isolates were ultimately PCR-screened for BPV13 using highly type-specific primers for amplification of a 771 bp product. PCR yielded amplification products approximately corresponding to this anticipated size in 2/99 cases. Tehese amplicons were re-amplified, then sequenced bidirectionally. Subsequent sequence alignments using BLAST could not identify these products as corresponding to BPV13. The result of this thesis suggests that BPV 13 does not occur in the majority of sarcoid-affected Austrian horses. It supports the theory that BPV 13 may represent a geographic variant of BPV1 and BPV2. Papillomaviridae are very „old“ viruses, so that there is the possibility that BPV 1, 2 and 13 stem from one ancestral BPV and have evolved independently to different BPV types according to their respective geographical distribution (Gottschling et al., 2007). 51 Obtained data can be regarded as representative despite the moderate sample size because the examined samples were collected from horses of different gender, age, breed and origin within a long time period (2007-2019).

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64 Blätter