Bachelorarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2022

Die Kultivierung von equinen Immunzellen ist ein noch relativ unerforschtes Thema doch bietet die Kultivierung große Chancen zum Verstehen von equinen Immunreaktionen auf definierte Stimuli. Da diese PBMCs sensible Zellen sind, ist es wichtig, ein optimales Nährmedium zu erzeugen, in dem sie nicht nur möglichst lang leben, sondern auch proliferieren können. Nur mit Zellen, die sich einige Zeit kultivieren lassen, können in vitro Forschungen zu immunmodulierenden Effekten funktionaler Futtermittelzusatzstoffen untersucht werden. So kann ein direkter Einfluss von diesen Substanzen auf die Zellen des Immunsystems festgestellt werden, und in dessen Folge einen Einzug in diverse Fütterungskonzepte finden. Normalerweise wird für diese Forschungszwecke bovines fetales Serum genutzt. Dieses ist nicht nur teuer in der Herstellung, sondern beinhaltet auch einige ethisch zu hinterfragende Aspekte. Nicht nur das Serum, auf denen die PBMCs kultiviert werden, sondern auch der Gerinnungshemmer im Rahmen der Probenentnahme spielt eine wesentliche Rolle. Hier scheint EDTA von Vorteil zu sein. In jedem der Seren war es möglich, auch nach 48h, lebende PBMCs mit dem beschriebenen Protokoll zu kultivieren. In absoluten Zahlen der lebenden Zellen schneidet eindeutig das fötale bovine Serum am besten ab. Dicht gefolgt wird dieses vom equinen Serum. Grundsätzlich ist es mit jedem der Seren gelungen, lebende equine Immunzellen zu kultivieren, doch die Ergebnisse lassen keinen eindeutigen Schluss auf ein spezielles und optimales Serum zu. Da wir keine signifikanten Unterschiede bei der absoluten Lebendzellzahl feststellen konnten, spricht nichts gegen die Verwendung von alternativen Seren. Aus Kostengründen und auch aus der Tierschutzperspektive empfiehlt es sich für kommende Experimente mit equinem Serum, trotz der guten Ergebnisse des FBS, zu arbeiten, da der Unterschied nicht so groß ist und die Proliferationsrate bei den equinen Zellen sogar besser war, sprich ein schnelleres Wachstum gegeben war.

The cultivation of equine immune cells is still a relatively unexplored topic but offers interesting approaches to understand the equine immune system. Since these PBMCs are sensitive cells, it is important to create an optimal culture medium where they can not only live as long as possible but also proliferate. Only with cells that can be cultivated for some time can in vitro research on immunomodulatory effects of functional feed additives be studied. Thus, a direct influence of these substances on the cells of the immune system can be determined, and as a consequence, find its way into various feeding concepts. Usually, bovine fetal serum is used for these research purposes. This is not only expensive to produce, but also contains some ethically questionable components. Not only the serum on which the PBMCs are cultured, but also the anticoagulant in the course of sample collection plays an essential role. Here EDTA seems to be of advantage. In each of the sera it was possible, even after 48h, to culture live PBMCs using this method and the protocol described. In absolute numbers of living cells, the fetal bovine serum clearly performs best. This is closely followed by the equine serum. In principle, each of the sera succeeded in culturing live equine immune cells in this way, but the results do not allow a clear conclusion on a specific and optimal, serum. Since we did not find any significant differences in absolute live cell counts, there is no reason not to use alternative sera. For cost reasons and also from the animal welfare perspective, it is recommended to work with equine serum for future experiments, despite the good results of the FBS, since the difference is not so great and the proliferation rate was even better with the equine cells, i.e., faster growth was given.

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