Diplomarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2021

Cystoisospora suis ist einer der wichtigsten Durchfallerreger beim Ferkel. Die Morbidität ist bei der Cystoisosporose hoch, die Mortalität hingegen sehr gering. Diagnostisch werden die Oozysten mittels Flotationsverfahren oder Autofluoreszenz nachgewiesen. Die einzige zugelassene Therapie ist der Einsatz von Toltrazuril. Zu den prophylaktischen Maßnahmen gehören gute Hygiene, sowie ein etabliertes Rein-Raus-Verfahren und die Anwendung wirksamer Desinfektionsmittel. Hierfür gibt es Leitlinien der DVG wie die Prüfung eines Desinfektionsmittels zu erfolgen hat, um für das jeweilige Einsatzgebiet eine Zulassung zu erhalten. Für C. suis existiert kein vergleichbares Verfahren oder Daten dazu. Als vergleichendes Modell wird die Leitlinie für Desinfektionsmittel gegen Ascaris suum (Larvenentwicklungshemmtest) herangezogen. Für die Untersuchung solcher Daten wurden Ferkel in drei Gruppen, welche zuvor randomisiert wurden, aufgeteilt und am dritten Lebenstag (SD3) mit Oozysten von C. suis infiziert. Eine Gruppe wurde mit einem Futterzusatz behandelt, die zweite Gruppe wurde mit Toltrazuril therapiert und die letzte Gruppe diente als Kontrollgruppe. Der Kot der Ferkel wurde mittels Kotausstrich, Autofluoreszenz und McMaster-Zählung untersucht. Die Oozysten wurden anschließend angereichert, um 6-Well-Platten mit ca. 500 Oozysten pro Well zu bestücken. Für den Sporulationshemmtest wurden vier Temperaturbereiche (4 °C, 11 °C, 24 °C, 40 °C) und ein Desinfektionsmittel (2%igem Flächendesinfektionsmittel mikrozid® AF liquid) bei Raumtemperatur an zwei Zeitpunkten (T1 und T4) ausgewählt, wobei bei 24 °C zusätzlich noch zwei Ansätze hergestellt wurden (T2 und T3). Der Futterzusatz wurde an vier Zeitpunkten (T1-T4) angesetzt. Die Platten wurden mindestens für vier Tage inkubiert, bevor mit der Zählung der Oozysten begonnen wurde. Die Ergebnisse der Auszählungen zeigten die stärkste Hemmung der Sporulation bei 4 °C. Die Sporulationsrate lag bei weniger als 3 %. Bei 40 °C und 11 °C sporulierten die Oozysten zwischen 30 % und 70 %, wobei hier die Resultate stärkere Schwankungen zeigten. Bei 24 °C betrug die Sporulationsrate durchschnittlich ca. 80 %. Bei dem 2%igem Flächendesinfektionsmittel mikrozid® AF liquid konnte der Ansatz von T1 nicht ausgewertet werden und die Probe von T4 zeigte im Durchschnitt 42 % an sporulierten Oozysten. Der getestete Futterzusatz konnte nur an den ersten beiden Zeitpunkten eine Sporulationshemmung erzielen und zu den letzten beiden Zeitpunkten keinen wesentlichen Unterschied zur Kontrollgruppe zeigen. Für zukünftige In-Vitro-Tests kann bei 4° C eine zuverlässige Hemmung erwartet werden und zur Lagerung unsporulierter Oozysten verwendet werden. Man könnte noch weitere Tests zur maximalen Haltbarkeit der unsporulierten Oozysten durchführen. Angelehnt an die Prüfverfahren der DVG wären Temperatur der verwendeten Desinfektionsmittel, Anwendungskonzentration und Einwirkdauer wichtige Parameter, um ein möglichst einheitliches Verfahren zu etablieren.

Cystoisospora suis is one of the most important causative agents of diarrhoea in neonatal piglets. Diarrhoea occurs at the age of 7-28 days and displays a pasty, liquid consistency with no blood present. Additionally, to diarrhoea, the daily weight gain of the piglets declines, which means a significant economic loss. The morbidity of cystosisosporosis is high, the mortality on the other hand rather low. Diagnostics to detect the oocysts include a modified flotation and fluorescence microscopy. The only approved drug for the treatment of cystoisosporosis is toltrazuril. Preventive measures include good hygiene practices such as all-in-all-out procedures and disinfection, although just a few are efficient against coccidia. Guidelines of DVG to test for efficacy of disinfectants are available for other parasites but not for C. suis. The test method of Ascaris suum larval development was taken as a comparison model. To investigate such conditions, piglets were divided into three randomized groups and infected with oocysts on the third day of life (SD3). One group was treated with a feed additive, the second group received toltrazuril and the last group was left untreated and served as control group. The faeces of the piglets were examined through faecal smears, autofluorescence and McMaster method. The oocysts were further concentrated to fill 6-well-plates with 500 oocysts each. The conditions selected for the sporulation inhibition assay were four temperatures (4 °C, 11 °C, 24 °C, 40 °C) and a disinfectant (2 % surface disinfectant mikrozid® AF liquid) at room temperature at two different points in time (T1 und T4), whereas at 24 °C there were made two additional samples (T2 and T3). The samples for the feed additive were prepared at four different points in time (T1-T4). The samples were incubated for at least four days before the oocysts were counted. The samples with the least sporulated oocysts were found at 4 °C. The sporulation rate was under 3 % at that temperature. At 40 °C and 11 °C the rate of sporulated oocysts was between 30 % and 70 % but the results varied a lot. At 24 °C the main sporulation rate was about 80 % of all the oocysts counted. The 2 % surface disinfectant mikrozid® AF liquid could not be examined at T1 and the second sample at T4 showed an average of 42 % of sporulated oocysts. The feed additive only showed a significant inhibition of sporulation at the first two days, a significant higher sporulation than the control group on the third day and did not differ from the control group on the last days. For future in vitro test procedures the temperature at 4° C provides a reliable inhibition of sporulation. There could be further testing to examine the durability of the unsporulated oocysts at that temperature. Similar to the guidelines of the DVG, a standardized temperature of the used disinfectants, an application concentration and an exposure time seems advisable to establish a consistent test.

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