2024 isPartOf:https://phaidra.vetmeduni.ac.at/o:2524 isPartOf:https://phaidra.vetmeduni.ac.at/o:72 Text Bachelor theses acnumber:AC17684748 doi:10.34876/09gc-fh81 https://phaidra.vetmeduni.ac.at/o:4729 eng http://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/ Bachelor thesis - University of Veterinary Medicine Vienna - 2024 The Lassa virus (LASV) is an Old World arenavirus endemic to West Africa and causes hemorrhagic fever in humans. Since LASV is classified as biosafety level 4 pathogen, work with infectious LASV is restricted to high containment laboratories. Fortunately, life cycle modelling systems are a powerful tool to investigate highly pathogenic BSL4 viruses such as LASV under biosafety level 1 conditions. The simplest life cycle modelling system is a minigenome system, which uses a miniature version of the viral genome (called “minigenome”). This system can be used to investigate the processes of viral replication and transcription in eukaryotic cells. To examine the whole viral life cycle including budding and entry, minigenome systems can be further advanced into transcription and replication-competent virus-like particle (trVLP) assays. This type of system includes proteins needed for viral budding and entry, either supplied by expression plasmids or from the minigenome itself (“multicistronic trVLP assay”). In this thesis, both a minigenome and a trVLP system solely based on LASV components were successfully developed. Moreover, these life cycle modelling systems were then used to investigate conserved amino acid residues within the LASV matrix protein Z, which is essential for viral budding and inhibition of RNA synthesis. The mutation of the conserved amino acid residues leucine (L) at position 71, and prolin (P) at position 72 were associated with loss of proper RNA synthesis inhibition by Z. Furthermore, mutation of L71 and aspartic acid (D) at position 22 displayed abnormalities in the formation of infectious viral particles. In conclusion, two reverse genetics systems capable of overcoming biosafety level 4 restrictions were developed and used to investigate conserved amino acid residues within LASV Z in detail. application/pdf Bachelorarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2024 Das Lassa-Virus (LASV) ist ein Altweltarenavirus, das in Westafrika endemisch ist und beim Menschen hämorrhagisches Fieber verursacht. Da LASV als Pathogen der Risikostufe 4 klassifiziert ist, ist die Arbeit mit infektiösem Viren nur in Laboren der höchster Biosicherheitsstufe 4 zulässig. Glücklicherweise sind Lebenszyklus-Modellierungssysteme eine zuverlässige Methode, um hochpathogene Viren wie LASV unter Bedingungen der Biosicherheitsstufe 1 zu untersuchen. Das einfachste Lebenszyklus-Modellierungssystem ist ein Minigenom-System, welches eine Miniaturversion des viralen Genoms (genannt "Minigenom") verwendet. Mit diesem System kann der Prozess der viralen Replikation und Transkription in eukaryotischen Zellen untersucht werden. Um den gesamten viralen Lebenszyklus einschließlich Knospung und Zelleintritt zu untersuchen, können Minigenomsysteme zu Transkriptions- und Replikations-kompetenten virusähnlichen Partikeln (trVLP)-Assays weiterentwickelt werden. Für diese Systeme werden Proteine, die für die Knospung und den Zelleintritt benötigt werden, entweder durch Expressionsplasmide oder aus dem Minigenom selbst ("multicistronischer trVLP-Assay") zur Verfügung gestellt. In dieser Arbeit wurde sowohl ein Minigenom als auch ein trVLP-System, welche ausschließlich auf LASV-Komponenten basieren, erfolgreich entwickelt. Darüber hinaus wurden diese Lebenszyklus-Modellierungssysteme dann verwendet, um konservierte Aminosäurereste innerhalb des LASV-Matrixproteins Z zu untersuchen, welches für die virale Knospung und Hemmung der RNA-Synthese essenziell ist. Die Mutation der konservierten Aminosäurereste Leucin (L) an Position 71 und Prolin (P) an Position 72 war mit dem Verlust der RNA-Synthesehemmung durch Z assoziiert. Darüber hinaus zeigte die Mutation von L71 und Asparaginsäure (D) an Position 22 Anomalien in der Bildung infektiöser Viruspartikel. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass zwei Reverse-Genetik Systeme entwickelt wurden, welche Untersuchungen des LASV in Laboren der Sicherheitsstufe 1 oder 2 zulässt. Außerdem wurden diese Systeme verwendet, um konservierte Aminosäurereste innerhalb von LASV Z im Detail zu untersuchen. Testo Tesi di laurea triennale Text Bachelorarbeit Development of a novel reverse genetics system to assess the functional interplay of Lassa virus proteins Barbara Posch Sabine Lagger Thomas Hoenen Walter Gunzburg