University of Veterinary Medicine Vienna Polarity reversal of canine intestinal organoids reduces proliferation and increases cell death Bachelorarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2023 Organoide stellen ein vielversprechendes Alternativmodell zu herkömmlichen Modellen dar, das gerade in Hinblick auf One-Health-Konzepte und die 3R unbedingt beachtet werden sollte. Die Polaritätsinversiondieser beschreibt dabei eine Methode, welche neue Ansätz der experimentellen Nutzung der Organoide ermöglicht.Es lässt sich festhalten, dass die Inversion der Polaritätder intestinalen Organoide sowohl die Apoptose als auch die Proliferation signifikant beeinflusst. Auch die Inversion der Polaritätverlief mit überraschender Effizienz. So ließen sich bereits nach 36 bis 48 Stunden beinahe keine basal-out Organoide mehr feststellen. Eine weitere erwähnenswerte Beobachtung ist die Tatsache, dass bereits nach eineinhalb StundenInkubation der Organoide in Organoid Harvesting Solution ein Großteil dieser apical-out bzw. eine gemischte Polarität aufwiesen. Dies zeigte sich in den DAPI/Phalloidin-Färbungen. Dieser Prozess lief demnach deutlich schneller ab als dies in bisher publiziertenExperimenten der Fall war.Die basal-out Organoide zeigten konstante, wenn nicht sogar steigende Proliferationsraten, während die apical-out Organoide nach einem kurzen Höhepunkt hinsichtlich der Viabilität in steigenden Apoptosewerten und einer sinkenden Zellzahl resultierten. Auch die immunhistochemischen Färbungen bestätigten diese Ergebnisse.Die mittels RT-qPCR untersuchten Markergene zeigten einestabile Genexpression in basal-und apical-out Organoiden. Bachelor thesis - University of Veterinary Medicine Vienna - 2023 Organoids represent a promising alternative model that should definitely be considered, especially with regard to One-Health concepts and the 3Rs. The polarity reversal of organoids poses a method that enables new approaches to the experimental use of organoids. It can be concluded that the polarity inversion of intestinal organoids significantly affected both apoptosis and proliferation. The process of polarity reversal also proceeded with surprising efficiency. Thus, almost no basal-out organoids could be detected after only 36 to 48 hours. Another unexpected finding was the fact that within one and a half hours of incubation in Organoid Harvesting Solution, the majority of the organoids exhibited apical-out or mixed polarity. The process of the polarity reversal was therefore significantly faster than in prior reports.The basal-out organoids showed constant, if not increasing, proliferation rates, whereas the apical-out organoids, after a short peak in terms of viability, resulted in increasing apoptosis levels and a decreasing cell number. Immunohistochemical staining also confirmed these findings. Marker genes examined by RT-qPCR further showed stable gene expression in basal- and apical-out organoids. https://phaidra.vetmeduni.ac.at/o:4694 en TEXT Bachelor theses Bachelorarbeit Tesi di laurea triennale Testo Tesi di laurea triennale Text Bachelorarbeit Text Bachelor theses 2023 2023 Maximilian Wagner Barbara Pratscher Sabine Brandt Georg Csukovich