https://phaidra.vetmeduni.ac.at/o:4586 Proteomic and genomic characterisation of Mycoplasma felis isolated from cats, wild Felinae and horses Eybl, Flora Tara Auguste Flora Tara Auguste Eybl Künzel, Frank Frank Künzel Spergser, Joachim Joachim Spergser text eng Diploma thesis - University of Veterinary Medicine Vienna - 2025 Mycoplasma (M.) felis is a globally distributed, opportunistic pathogen primarily associated with infections in domestic cats. It has been implicated in various clinical manifestations including conjunctivitis, respiratory tract disease, arthritis, and serosal inflammation. Although commonly considered a commensal organism of feline mucosal surfaces, accumulating evidence highlights its pathogenic potential under certain host or environmental conditions. This thesis investigated the relatedness of M. felis isolates obtained from domestic cats, wild Felinae, and horses. A total of 49 M. felis isolates including two different colony morphotypes (opaque, lucent) of seven isolates, and the type strain of M. felis (COT) were analyzed using genomic and proteomic typing methods. A newly established core genome multilocus sequence typing (cgMLST) scheme was employed to construct phylogenetic relationships among M. felis strains. For the proteomic characterization matrix assisted laser desorption ionization – time of flight (MALDI-ToF) mass spectrometry was used to generate protein mass spectra from which a dendrogram reflecting spectral distances was created. The newly developed cgMLST scheme encompassing 454 target genes revealed high diversity of the studied M. felis strains separated into two major clusters, with some evidence of hostspecific clustering of equine isolates. Interestingly, the colony variants of M. felis isolates (opaque or lucent) each clustered together or even showed an identical cgMLST profile, suggesting that the colony morphotype is driven by genes that are not part of the core genome. In contrast, although the MALDI-TOF mass spectrometry also grouped the isolates into two main clusters, no correlations were found between clustering and epidemiologic data or phylogenetic grouping based on cgMLST. Overall, the newly established cgMLST appears to be a suitable method for investigating the epidemiology of M. felis infection and gaining insights into the population structure of this underestimated pathogen. Diplomarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2025 Mycoplasma (M.) felis ist ein weltweit verbreiteter, opportunistischer Erreger, der primar mit Infektionen bei Hauskatzen in Verbindung gebracht wird. Der Erreger wird mit verschiedenen klinischen Krankheitsbildern assoziiert, darunter Bindehautentzundung, Atemwegserkrankungen, Arthritis und Serositis. Obwohl M. felis haufig als harmloser Bewohner der Schleimhaute von Katzen angesehen wurde, gibt es zunehmend Hinweise auf sein pathogenes Potenzial. In der vorliegenden Arbeit wurden die Verwandtschaftsverhaltnisse zwischen M. felis-Isolaten untersucht, die von Hauskatzen, wilden Kleinkatzen (Felinae) und Pferden stammten. Insgesamt wurden 49 M. felis-Isolate, darunter zwei unterschiedliche Koloniemorphotypen (opak, transparent) von sieben Isolaten, und der Typstamm COT mittels genomischer und proteinanalytischer Typisierungsmethoden untersucht. Fur die genotypische Charakterisierung wurde ein neuentwickeltes Kerngenom-Multilokus- Sequenztypisierungsschemas (cgMLST) eingesetzt, um die phylogenetischen Verwandtschaftsbeziehungen zwischen den M. felis-Stammen darzustellen. Fur die proteinanalytische Charakterisierung wurde die Matrix-unterstutzte Laser-Desorption- Ionisation mit Flugzeitanalyse (MALDI-ToF) Massenspektrometrie angewandt und Distanzwerte der dabei generierten Protein-Massenspektren als Dendrogramm abgebildet. Mithilfe des neuetablierten cgMLST-Schemas, welches 454 Zielgene umfasste, konnte eine hohe Diversitat der untersuchten M. felis-Stamme ermittelt werden, die in zwei Hauptcluster unterteilt wurden. Hinweise auf eine wirtsspezifische Gruppierung waren durch die Ausbildung eines aus equinen M. felis-Isolaten bestehenden Subclusters erkennbar. Interessanterweise gruppierten sich die Kolonievarianten von M. felis-Isolaten (opake oder durchscheinende Kolonien) jeweils zusammen oder zeigten sogar ein identes cgMLST Profil, was darauf hindeutet, dass der Koloniemorphotyp von Genen gesteuert wird, die nicht zum Kerngenom gehoren. Im Gegensatz dazu gruppierte die MALDI-TOF-Massenspektrometrie die Isolate zwar auch in zwei Hauptcluster, es konnten jedoch keine Zusammenhange zwischen der Clusterbildung und den epidemiologischen Daten sowie der phylogenetischen Gruppierung mittels cgMLST festgestellt werden. Insgesamt erscheint die neuetablierte cgMLST eine geeignete Methode zu sein, um die Epidemiologie von M. felis-Infektionen darzustellen und Einblicke in die Populationsstruktur dieses unterschatzten Erregers zu gewinnen. http://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/ https://phaidra.vetmeduni.ac.at/api/object/o:4586/download 10.34876/jamy-ad97 https://phaidra.vetmeduni.ac.at/o:2549 https://phaidra.vetmeduni.ac.at/o:72 application/pdf 1.15 MB 2025