o:208 Einfluss der CD146-Expression auf die Proliferation von primären caninen Melanomzellen de Diplomarbeit - Veterinärmedizinische Universität Wien - 2019 Diese wissenschaftliche Arbeit hatte zum Ziel, Zusammenhänge zwischen Proteinexpression des Zelladhäsionsmolekül CD146 und dem Wachstum von caninen oralen malignen Melanomzellen aufzuzeigen. Nach Schmid et al. (2019) wird das Protein CD146 auf der Zelloberfläche und intrazellulär von caninen Melanomzellen und Metastasen exprimiert, fehlt jedoch bei benignen Muttermalen (Lei et al., 2015). Diese Merkmale lassen vermuten, dass die Expression von CD146 eine Rolle bezüglich Invasivität, Progression und Prognose von caninen oralen malignen Melanomen spielen könnte. Aufgrund der Aggressivität und hohen Metastasierungs-und Mortalitätsrate, die diese Art von Tumoren bei Hunden aufweisen, gilt es nach Ursachen und vor allem weiteren Therapiemöglichkeiten zu forschen. Aus verschiedenen, histopathologisch charakterisierten caninen Melanomzelllinien wurde jene mit der höchsten CD146-Expression ermittelt und für die weiteren Versuche verwendet. Für die Herabregulierung von CD146 wurden verschiedene siRNAs sowie unterschiedliche Zeitpunkte für die Transfektion mit siRNA mittels Zeitkurve getestet. Das weitere Vorgehen basierte auf der Durchführung von Western Blots zur Bestimmung der optimalen siRNA- Konzentration, der optimalen Inkubationszeit und Einfluss der CD146-Expression auf die Proliferation von caninen primären Melanomzellen. Die Ergebnisse zeigten, dass die Zelllinie cRGO1 die höchste CD146-Expression aufwies. Die Inhibition der Expression wurde mit allen verwendeten siRNAs #s530434,35 und 36 in den jeweiligen Konzentrationen 10, 25 und 50 nM erzielt. Die weiteren Versuche wurden mit siRNA #s530434 in der Konzentration 10 nM vorgenommen. Achtundvierzig und 72 h nach Transfektion mit siRNA #34 wurde die Herabregulierung der Expression von CD146 am deutlichsten. Bezüglich dem Proliferationsverhalten caniner oraler maligner Melanomzellen nach siRNA- vermittelter Herabregulierung von CD146 konnte mittels Auszählung der Gesamtzellzahl sowie Lebendzellzahl nach 0, 24, 48 und 72h gezeigt werden, dass die Proliferation von cRGO1 durch CD146-Inhibition signifikant gehemmt wurde. CD146-inhibierte cRGO1-Zellen proliferierten nach 48h und 72h signifikant weniger als mit Kontroll-siRNA transfizierte cRGO1. Zusammenfassend kann man sagen, dass die Proliferation von cRGO1-Zellen unter anderem von CD146 abhängig ist und durch Inhibition dieses Proteins mittels siRNA das Wachstumsverhalten von caninen oralen malignen Melanomzellen vermutlich generell beeinflusst werden kann. Diese Erkenntnis könnte sich als wertvoll in Hinblick auf zukünftige Therapiemöglichkeiten beim caninen oralen malignen Melanom erweisen. The aim of the thesis was to assess correlations between expression of the cell adhesion protein CD146 and proliferation of primary canine oral malignant melanoma cells. According to Schmid et al. (2019) the expression of CD146 occurs on the surface of and within canine melanoma cells and metastases. These features presume that CD146 expression may serve as diagnostic marker with respect to invasiveness, progression and prognosis of canine oral malignant melanoma. Due to the aggressiveness and high metastatic potential of these canine neoplasms, further research is needed regarding their etiology and innovative treatment options. Different canine melanoma cell lines were tested for CD146 expression. The cell line with highest expression rate was used in further experiments. The downregulation of CD146 was executed with different siRNAs and also at different points to generate a time curve revealing the optimum siRNA incubation time. Western Blots were used to identify the ideal siRNA concentrations and incubation time and also to evaluate the impact of CD146 expression on proliferation of canine primary melanoma cells. The results showed that the highest expression of CD146 was found in cell line cRGO1. The inhibition of expression was achieved by all used siRNAs (#s530434, 35 and 36) at all concentrations assessed (10, 25 and 50 nM). SiRNA #s530434 at a concentration of 10 nM was used in further experiments. Inhibition of CD146 expression by this siRNA was most effective 48 and 72 hours post infection. Regarding the proliferation behavior of canine oral malignant melanoma cells after CD146 downregulation by siRNA, total and living cell counting revealed that the proliferation of cRGO1 cells was blocked by CD146-inhibition. In conclusion, proliferation of cRGO1 cells depended on CD146 expression, suggesting that canine oral malignant melanoma cells may need CD146 for their proliferation. Provided that this assumption can be confirmed, inhibition of CD146 may be an interesting treatment strategy for canine oral malignant melanoma in the future. 1552151 AC15703739 2020-08-24T08:02:34.329Z 44 no 46 Carina Franczik 1552167 Sabine Brandt 1552167 Barbara Pratscher 1562799 Miriam Kleiter application/pdf 570381 https://phaidra.vetmeduni.ac.at/o:208 no yes 1 70 1740 2019 39 Blätter 2019